干细胞应用与干细胞调控

? ? ? 干细胞的调控是指给出适当的因子条件，对干细胞的增殖和分化进行调控，使之向指定的方向发展。

? ? ? 1.内源性调控

? ? ? 干细胞自身有许多调控因子可对外界信号起反应从而调节其增殖和分化，包括调节细胞不对称分裂的蛋白，控制基因表达的核因子等。另外，干细胞在终末分化之前所进行的分裂次数也受到细胞内调控因子的制约。

? ? ? (1)胞内蛋白对干细胞分裂的调控

? ? ? 干细胞分裂可能产生新的干细胞或分化的功能细胞。这种分化的不对称是由于细胞本身成分的不均等分配和周围环境的作用造成的。细胞的结构蛋白，特别是细胞骨架成分对细胞的发育非常重要。如在果蝇卵巢中，调控干细胞不对称分裂的是一种称为收缩体的细胞器，包含有许多调节蛋白，如膜收缩蛋白和细胞周期素a。收缩体与纺锤体的结合决定了干细胞分裂的部位，dc-cik细胞培养，从而把维持干细胞性状所必需的成分保留在子代干细胞中。

? ? ? (2)转录因子的调控

? ? ? 在脊椎动物中，转录因子对干细胞分化的调节非常重要。比如在胚胎干细胞的发生中，转录因子oct4 是必需的。oct4 是一种哺乳动物早期胚胎细胞表达的转录因子，它诱导表达的靶基因产物是fgf-4 等生长因子，干细胞培养，能够通过生长因子的旁分泌作用调节干细胞以及周围滋养层的进一步分化。oct4 缺失突变的胚胎只能发育到囊胚期，其内部细胞不能发育成内层细胞团。另外白血病抑制因子(lif)对培养的小鼠es 细胞的自我更新有促进作用，而对人的成体干细胞无作用，说明不同种属间的转录调控是不完全一致的。又如 tcf/lef 转录因子家族对上皮干细胞的分化非常重要。tcf/lef 是wnt 信号通路的中间介质，当与β-catenin 形成转录复合物后，促使角质细胞转化为多能状态并分化为毛囊。

使用胰蛋白酶时加入 e dta的目的是什么

? ? ? 体外培养的细胞受到严重污染时，有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此，防止污染，预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终，才能将发生污染的可能性降到比较小的程度。 一般预防可从以下几方面着手：

? ? ? (1)添加抗生素 各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好(但迄今尚无对抗支原体抗生素)。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生素，或尽可能不用抗生素处理。

? ? ? (2)从物品、用品消毒灭菌着手 细胞培养所用物品清洗、消毒要，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，山东细胞培养，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择后过滤的液体进行检测。定期对培养箱进行消毒。具体操作：75%的搽拭培养箱后，使用可移动的紫外灯至少消毒30min，加入高压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制300ml 的饱和酸铜加3l 灭菌超纯水混合成酸铜溶液加入水槽中。

? ? ? (3)从操作者做起

? ? ? ①进无菌室前要洗手，按规定穿隔离衣。开始操作前要用 75%棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。

? ? ? ②操作者动作要轻，安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意，金属器械不能在火焰中长时间烧灼，以防退火；烧过的器械要冷却后才能使用；已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，细胞培养，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养液中；胶塞、乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞，同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。

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